Venne eretto dal Vasari e completato dal Buontalenti. Lo scopo di questa costruzione era racchiudere i 13 Uffizi, allora collocati in sedi separate, da cui prenderà il nome.
Il Teatro Mediceo, all'interno del Palazzo deli Uffizi è opera del Buontalenti e ai tempi di Firenze capitale d'Italia fu sede del Senato.
L'edificio ha la strana forma del ferro di cavallo e poggia su un loggiato decorato da nicchie dentro le quali si trovano le statue di valorosi uomini fiorentini vissuti dal Medioevo all'800.

Oggi il Palazzo è la sede della Galleria degli Uffizi, Bande Nerela più importante galleria d'arte al mondo.Fondamentale per le scuole artistiche toscane dal '200 in poi, comprende opere di pittori veneti, romani, emiliani, fiamminghi, tedeschi, spagnoli e francesi. Presenti capolavori di Cimabue, Giotto, Gentile da Fabriano, Paolo Uccello, Piero della Francesca, Botticelli, Leonardo, Perugino, Giambellino, Correggio, Mantegna,Michelangelo, Raffaello, Tiziano, Tintoretto, Caravaggio, Rembrandt, Goya e moltissimi altri. Non meno importanti le statue classiche ed ellenistiche, che documentano il collezionismo dei Medici. Inoltre le raccolte degli arazzi, dei marmi antichi, delle miniature. Al pianterreno, nei locali della ex chiesa di S. Pietro Scheraggio, sono collocati pregevoli affreschi.